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实时荧光PCR技术是新冠病毒核酸检测的重要步骤。每一个标本的检测了局城市以一张扩增曲线图出现，必要检验人员的“专业慧眼”去分辨，判断出“阴性”还是“阳性”。然而在现实操作中，核酸扩增曲线并非次次“美满”，易受到多种成分影响。因而若何判读扩增曲线，对正确汇报新冠核酸检测了局至关沉要。
正常扩增曲线长啥样？
正常扩增曲线呈S型，分为基线期、指数肇始期、指数扩增期和平台期，且要求拐点明显，整体平行性好，基线平而无上扬景象。
异常扩增曲线解析
异常扩增曲线是核酸检测人员最为头疼的问题。分辨扩增曲线状态、分析产生异常扩增曲线的原因是检测人员的必备技术。每一条扩增曲线的判读必要慧眼鉴别和经验处置。我们总结了检测过程中遇到过的异常扩增曲线，与各人进行分享。
01 内标扩增曲线异常
正常的内标扩增曲线是尝试有效性的基础，可反映样性质量、抽提和扩增效能。
【曲线特点】：
【类型一】某标本内标无S型扩增曲线。
【类型二】表源性内标呈离散型曲线。
【原因分析】：
a) 标本采样欠佳，没有刮取到足够的鼻咽部细胞。
b) 标本保留不当，核酸降解。
c) 标本加错地位或漏加。
d) 提取失败：裂解液未混匀（表源性内标）、提取仪故障等。
e) 扩增失败：漏加反映液、模板加错孔位、混入抑造扩增反映的滋扰物等。
【解决规划】：
a) 沉新采集样本。
b) 送检标本实时检测，室温搁置不超过4h。
c) 依照规范化流程进行有关操作。
d) 定期对在岗人员进行操作查核。
【注】内标扩增曲线异常，则该批或相应标本了局无效，需沉新采样或沉新检测。
02 基线设定不当的异常扩增曲线
软件默认基线设定的扩增曲线呈波浪型，导致Ct值偏大，可能会被误判为阴性。
软件默认基线设定不正确造成扩增曲线异常。
凭据检测试剂的要求设定合适的基线。
03 软件优化造成的异常扩增曲线
软件优化后扩增曲线向斜上方抬起，导致Ct减幼，凭据优化后扩增曲线会误判为阳性，但原始信号未有显著扩增。
凭据设定基线，软件在自动优化扩增曲线时会放大微幼异常信号。
查看原始曲线，对基线稍作调整。
【注】自动优化软件会放大微幼的异常信号，可凭据原始曲线判断信号真假。
04 多个标本单靶标通路翘尾
多个标本出现单靶标通路的扩增曲线翘尾。
a) 反映液配造后保留不当，如荧光探针断裂。
b) 存在阳性质控传染或者其他荧光物质传染。
c) 扩增试剂/耗材的批间差距导致非特异性扩增增长（如试剂更新后Mg2+浓度过高）。
a) 依照说明书要求保留配造的扩增反映液。
b) 提获得到的核酸应实时进行后续处置，不然实时封盖，预防混入阳性质控或其他滋扰物；尝试室每天按时清洁消毒以解除潜在的滋扰成分。
c) 试剂/耗材批号更换前应进行比对尝试验证。
05 靶标通路呈低平S型曲线
标本靶标通路呈低平且非典型S型扩增曲线，标本与弱阳性质控的荧光强度存在显著差距。
a) 标本存在滋扰物质。
b) 提取纯化不齐全。
标本沉新检测，必要时可使用分歧的检测试剂进行确认。
【注】对疑似标本建议使用分歧的检测试剂进行确认。在异常扩增曲线判断时，应凭据整批标本的扩增情况（弱阳性质控扩增曲线）综合判断。
06 蒸发引起的异常扩增曲线
反映系统蒸发，终体积削减，荧光强度产生变动导致阴性扩增曲线整体呈斜向上或山域型。
a) 在扩增过程中因热盖导致管盖爆裂/光学膜分裂。
b) 未盖紧管盖/刮紧光学膜。
c) 未使用配套/质量合格的耗材。
a) 定期查抄扩增仪状态，确保热盖温度正常。
b) 上机前盖紧管盖/刮紧光学膜。
c) 使用厂商推荐的合格扩增耗材。
d) 调整基线可适当纠正蒸发引起的异常信号，有助于后续的扩增曲线判读。
07 气泡引起的异常扩增曲线
扩增曲线出现剧烈或显著崎岖。
反映系统内有大气泡形成折射，滋扰荧光的采集。
a) 加样时削减气泡的产生，同时上机前可通过离心削减气泡。
b) 调整基线可适当纠正气泡引起的异常信号，有助于后续的扩增曲线判读。
08 锯齿形异常扩增曲线
所有通路的扩增曲线出现锯齿状。
扩增仪电压不稳、采光或者滤光片故障。
查抄扩增仪电压和光路系统，实时排除硬件故障，预防后续检测的异常了局。若扩增仪故障严沉影响扩增曲线判读时应沉新检测。
总结
新冠核酸检测过程中每一个环节的操作都有可能产生异常扩增曲线，滋扰了局判读。检测人员在上岗前需实现操作培训和查核，在现实工作中严格遵循规范化流程，把握专业知识，堆集实际经验，能力保障新冠核酸的检测质量。
